होली रूड पैलेस में हॉल। वह कहते हैं कि शहर में दंगे होते हैं। भीड़ के सिर पर कोई अपरिचित - मम्मे, नकाबपोश, घंटियों के साथ नर्तकियां, काले हुड में लोग - धमकी दी, भविष्यवाणी की और लोगों से रानी की बात न मानने का आग्रह किया। क्वीन रिकियो के दरबारी ने पुष्टि की कि वह समय-समय पर देखता है क्योंकि लोग इन उपदेशों को उत्सुकता से सुनते हैं। पेज आगे बताता है कि लोग रानी के चैपल चिल्लाते हुए चिल्लाते हैं: "पापियों का घोंसला!", कि रानी के पति डारले के भैंसे ने वेदी तक छलांग लगा दी और उपदेश देने का नाटक करने लगे और लोगों ने उनका मज़ाक उड़ाते हुए जवाब दिया। क्वीन मैरी स्टुअर्ट निराशा में। उसे लगता है कि लोगों के प्रति घृणा, अधिकांश दरबारियों ने उसे छोड़ दिया है; वह सोचती है कि स्कॉटलैंड के लोगों की ईसाईयत से उसकी ईसाईयत इतनी अलग कैसे हो सकती है। रिको ने दंगों के लिए जिम्मेदार लोगों को दंडित करने के लिए तुरंत एक डिक्री तैयार करने का प्रस्ताव रखा। मारिया अपने पृष्ठ को निर्देशित करती है, पृष्ठ स्पष्ट करता है कि क्या रानी के पति हेनरिक डैर्नली का नाम दर्ज करना है। मैरी हिचकिचाती है; उसे शक है कि दंगे उसी से प्रेरित थे - आखिरकार, भीड़ का नेतृत्व राजा की भैंस ने किया। यहाँ रिकसिओ उसे याद दिलाता है कि वह रानी है; वह सूरज की तरह है, और उसे परमेश्वर से दंड देने का अधिकार है। वह तुरंत रानी के फरमान की घोषणा करने के लिए ड्यूटी ऑफिसर को बुलाने की मांग करता है। डगलस प्रवेश करता है। मारिया ने उसे पेपर को रॉयल चांसलर मोर्टन के पास ले जाने के लिए कहा, ताकि वह मुहर लगा दे। डगलस डिक्री को स्कैन करता है और देखता है कि इसमें राजा का नाम नहीं है। वह रानी से इस बारे में पूछता है। रिकसिओ उसके लिए जिम्मेदार है। डगलस अपना आपा खो रहा है। वह रानी से खूनी दमन के उपायों का उपयोग नहीं करने का आग्रह करता है, संकेत देता है कि वह इसे फ्रांसीसी या इतालवी प्रभाव के रूप में देखता है। लेकिन रानी ने अपनी इच्छा के विपरीत अवज्ञा विषयों को खत्म करने के लिए उसे अपनी शक्ति की याद दिलाई। Riccio और डगलस के बीच झगड़ा शुरू हो जाता है, डगलस Riccio को एक द्वंद्वयुद्ध की चुनौती देता है और शपथ लेता है कि वह कल वेनिस को मार डालेगा। रानी निकल जाती है और रिकियो को दूर ले जाती है। डगलस अकेला रह गया है, वह एक विवाद पर विचार कर रहा है। मॉर्टन प्रवेश करता है। डगलस उसे डिक्री दिखाता है। मॉर्टन अनिर्णायक है: वह राजा और रानी दोनों के क्रोध से डरता है। मोहर के बिना, मॉर्टन राजा को बोली लगाता है। इस समय, हेनरी अपने जस्टर निक के साथ बातचीत में लगा हुआ था, जो उसे इस तथ्य से चिढ़ाता है कि स्कॉटलैंड में रानी की वास्तविक शक्ति है, और हेनरी केवल उसका पति है, जो रानी करीबी लोगों को चुनती है, उदाहरण के लिए, यह इतालवी वीणा रिकसीओ ... इस समय, मॉर्टन एक दुर्भाग्यपूर्ण डिक्री लाता है। गुस्से में राजा, वह Riccio को मारने का फैसला करता है। राजा लिंडसे ने अदालत में प्रवेश किया, वह राजा को नए अधिग्रहित बाज़ के साथ शिकार करने के लिए कहता है। मॉर्टन जवाब देता है कि राजा के पास पहले से ही एक व्यवसाय है। लिंडसे स्वेच्छा से Riccio के खिलाफ साजिश में शामिल हो जाता है। उसने सचमुच आज रात रिकियो को मारने से मना किया, क्योंकि उसे कल सुबह उसे मारना होगा। तब हेनरी ने देरी का फायदा उठाते हुए, ज्योतिषी को ज्योतिषी के पास यह पता लगाने के लिए भेजा कि तारों का स्थान उनके इरादों के लिए क्या है।

अपनी प्रयोगशाला में ज्योतिषी (वह भी एक कीमियागर है) अपने आप से तर्क करता है कि अनुभव विज्ञान की निरर्थकता की पुष्टि करता है, इस उद्देश्य, सितारों की इच्छाशक्ति मनुष्य पर हावी होती है, अच्छे और बुरे का निपटान करती है। निक में आता है, बुद्धिवाद के साथ छिड़का जाता है, ज्योतिषी उसे बुद्धि में नीच नहीं है। निक की रिपोर्ट है कि राजा ने उसे रिसीको के भाग्य के बारे में पूछने के लिए भेजा और ज्योतिषी को रिक्कीो की मृत्यु की भविष्यवाणी करने के लिए कहा। ज्योतिषी जवाब देता है कि सितारे उसे बताएंगे, न कि लोगों को, और बदले में जस्टर की मौत की भविष्यवाणी करता है। इसके साथ ही वह चला गया। ज्योतिषी के कारण रानी का पृष्ठ दिखाई देता है। पेज अपनी मालकिन से प्यार करता है। ज्योतिषी उसे रानी को बताने के लिए कहता है कि आज वह जिस आदमी से प्यार करती है वह मर जाएगा। "कैसे, आज बोटवेल मर जाएगा?" - एक पृष्ठ को मुक्त करता है। ज्योतिषी हैरान है। उसने रिकसीओ को ध्यान में रखा था और उसे इस बारे में चेतावनी देने के लिए पृष्ठ पर दौड़ लगा रहा है। अकेले छोड़ दिया, ज्योतिषी आश्चर्य करता है - यह भी सितारों से दिखाई दिया कि बोटवेल किसी तरह रानी के साथ अंधेरे से जुड़ा था - मंगल, शनि के माध्यम से ... बोटवेल प्रवेश करता है। उनके एकालाप से यह स्पष्ट हो जाता है कि उन्होंने अप्रत्याशित रूप से खुद को एक ज्योतिषी के घर में पाया। एहसास हुआ कि वह कहाँ है, बोटवेल ने ज्योतिषी से पूछा कि उसने जीने के लिए कितना छोड़ा है। बूढ़ा आदमी कहता है कि तीन साल और वह बोटवेल राजा होगा। बोटवेल जहर की एक बोतल निकालता है जिसके साथ वह आत्महत्या करना चाहता था, उसे फेंकना चाहता है - और झिझक रहा है। दरअसल, महल की साज़िश के माहौल में, कोई भी हथियार काम में आएगा। वह जा रहा है।

पेज रानी को बताता है कि रिकियो जल्द आएगा। रानी उसके लिए तत्पर है - उसकी राय में, वह अकेले ही उसके प्रति वफादार रही। "और बॉटवेल?" पेज पूछता है। "बॉटवेल कौन है?" - रानी की रुचि है। एक हैरान पेज मैरी को बताता है कि कैसे नौका विहार करते समय, एक तेज हवा ने रानी के सिर से एक गुलाब उतारा, एक फूल पानी में गिर गया। और फिर दरबारियों में से एक - बोटवेल - नाव में चढ़ गया और डरते हुए पानी से गुलाब पकड़ने के लिए रोवर का पीछा किया। कहानी सुनने के बाद, मैरी प्रार्थना करने के लिए एक पेज भेजती है। वह भगवान के सामने स्वीकार करती है कि उसके पास बोटवेल के लिए अपने प्यार का विरोध करने की अधिक ताकत नहीं है। रानी जानती है कि कोर्ट में उसे रिकसिओ के साथ प्यार माना जाता है। रिकसिओ प्रवेश करता है। मरियम एक नश्वर खतरे की सूचना देती है जो उसे धमकी देता है और ठंड उसे अलविदा कहती है, उसे उस जहाज की ओर इशारा करती है जो उसे रोम ले जाएगा। हताशा में, रिकसिओ रानी को छोड़ने का निर्णय रद्द करने की भीख मांगता है। रानी अडिग है।

हेनरिक, मॉर्टन, और लिंडसे ने रिकिसो के आसन्न प्रस्थान का पता लगाया और जल्दबाजी में उसे मारने या उसे पालने के लिए सम्मानित किया। तब डगलस प्रकट होता है और रिपोर्ट करता है कि रिकसिओ पहले ही रवाना हो चुका है। निराशा में डगलस, वह खूनी बदला लेने के लिए तरसता है, उसके शूरवीर सम्मान को चोट लगी है। अचानक वे एक पृष्ठ पर मिलते हैं जो रानी को रिकसिओ से एक नोट लाता है - उसने नहीं छोड़ा और शाम को उसके साथ रहेगा। षड्यंत्रकारी नोट छीन लेते हैं।

मारिया अपने कमरे में कशीदाकारी में व्यस्त हैं। रिकसिओ, जो आया था, उसे समझाता है कि वह नहीं छोड़ सकता है, क्योंकि वह सुबह डगलस के साथ द्वंद्वयुद्ध करता है। वह स्वीकार करता है कि उसे अपने प्यार के बिना जीवन की आवश्यकता नहीं है। वह मैरी से उसे गुलाब की माला देने के लिए कहता है - वह रोम में वेदी पर फूल लगाएगी ... हेनरी, डगलस और डिंडसे रिकिशो को मारेंगे और मारेंगे। रानी बेहोश। डगलस शर्म और आतंक से मारा जाता है - वह स्वेच्छा से निर्वासन में रहता है। अगर रानी उससे नफरत करेगी तो हेनरी चिंतित है। लिंडसे राजा को दूर ले जाता है, आने वाले शिकार के बारे में उससे फुसफुसाता है। रानी बोटवेल को रानी द्वारा आमंत्रित किया जाता है। मैरी उसके होश में आती है, बोटवेल को देखती है और उससे अपने प्यार को कबूल करती है। बोटवेल उसे स्वीकार करने के लिए मजबूर करता है कि वह हेनरी की मौत चाहता है और उसे अपनी जहर की बोतल देता है, यह कहते हुए कि यह नींद की गोली है। मैरी राजा को यह "दवा" देती है, लेकिन जहर बफ़र पीता है। हालांकि, कुछ भी नहीं जानलेवा साज़िश को रोक सकता है - बोटवेल ने किंग हेनरी के घर को उड़ा दिया। दूरी में, भीड़ के बढ़ते रोना सुनाई देता है। रानी के साथ बॉटवेल छिप रहे हैं।